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CCK-8 細胞增殖與毒性檢測試劑盒

逆战助手怎么补签 www.mkrqm.icu 產品簡介

  • CCK-8試劑盒,是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

  • WST-8是一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑1-MethoxyPMS存在的情況下,可以被還原生成橙黃色水溶性的甲臜(Formazan) (1)。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。

1. WST-8 分子結構式及其檢測原理

產品優勢:

本試劑盒提供了一種靈敏度高、操作簡便、使用安全的細胞增殖與毒性檢測方法。與傳統的 MTT 實驗相比具有明顯的優勢:

  • CCK-8 法是用于細胞因子等誘導的細胞增殖檢測,也可以用于抗癌藥物等對細胞有

  • 毒試劑誘導的細胞毒性檢測,或一些藥物誘導的細胞生長抑制檢測等與細胞活性和增殖相關的實驗的一種高靈敏度,無放射性的比色檢測法

  • CCK-8 法對細胞無毒性,可以多次測定選取最佳測定時間 ,與 MTT 方法相比線性范圍更寬,靈敏度更高

  • CCK-8 溶液不需配制,可以直接加入到細胞樣品中,即開即用,比 MTT 更加穩定

  • 實驗結果重復性好,適合大規模,高通量的樣品檢測

  • MTT 實驗生成的 formazan 不是水溶性的,需要使用 DMSO 等有機溶劑溶解而本方法產生的 formazan 是水溶性的,不僅省去了溶解步驟,更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差

產品包裝:

產品貨號

規格

數量

D002-1

50

0.5ml×1

D002-2

500

1ml×5

D002-3

10000

25ml×4


貯藏條件:

CCK-8 溶液在避光、0-5°C的條件下可以保存 1 年,若長期不用可在-20°C下避光保存 2 年。建議分裝后保存于-20°C,使用時提前于 4°C解凍,請避免反復凍融,否則增加背景值,干擾實驗結果。


所需的設備及耗材:

  • 10ul、100-200 ul 以及多通道移液器

  • 酶標儀(帶有 450 nm 濾光片)

  • 96 孔培養板

  • CO2 培養箱


使用方法:

  1. 96孔板中接種細胞懸液(100ul/),通常細胞增殖實驗每孔約2000個細胞,細胞毒性實驗每孔約5000個細胞,具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等因素決定)。

  2. 按照實驗需要,進行培養并給予0-10ul特定的藥物刺激,處理一段適當的時間 (例如:6,12, 2448小時)。

  3. 每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培養體積為200ul,則需加入20ul CCK-8溶液,以此類推??梢雜眉酉嚶α肯赴嘌?/span>CCK-8但不加細胞的孔作為空白對照,若擔心所使用的藥物會干擾檢測,需設置加相應量細胞培養液、藥物和CCK-8溶液但不加細胞的孔作為空白對照。

  4. 在細胞培養箱內繼續孵育1-4小時,具體時間可以通過預實驗確定。預實驗時可以在0.5、1、24小時后分別用酶標儀檢測,然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續實驗。

  5. 用酶標儀測定在450 nm處的吸光值,若無450nm濾光片,可以使用420-480nm的濾光片。如果樣品為高渾濁度的細胞懸液,可以使用大于600nm的波長,例如650nm,作為參考波長進行雙波長測定。

  6. 如果需要暫時不測定O.D值,可以向每孔中加入10ul 0.1M HCl溶液或者1% w/vSDS溶液,避光保存在室溫,24小時內吸光度不會發生變化。

注意事項:

  1. 使用 96 孔板進行檢測時,如果細胞培養時間較長,請注意蒸發問題??山?96 孔板外圍一圈加培養基、水或 PBS 保濕。同時,可以把 96 孔板置于培養箱內靠近水盤的位置以緩解蒸發。

  2. 培養時間根據細胞種類的不同和每孔內細胞數量的多少而不同。在正式實驗前,建議先做預實驗摸索鋪板的細胞數量以及加入 CCK-8 試劑后的培養時間。

  3. 鋪板時請注意保證每個孔細胞數量均勻,建議鋪板過程中注意時?;煸?,防止因細胞沉淀造成不均勻。加入 CCK-8 后請前后左右輕輕晃動培養板數次,使培養基 和CCK-8 溶液充分混勻。

  4. 本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應,如果待測物質有氧化性或還原性,可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養基,去掉藥物的影響。若藥物影響比較小的情況可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

  5. 加入 CCK-8 時,如果細胞培養時間較長,培養基顏色或 pH 值已變化,建議換用新鮮的培養基。

  6. 用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡,否則會干擾測定。

  7. 本試劑盒系無菌灌裝生產。在使用過程中,請在生物安全柜內無菌操作,避免污染。

  8. 為了您的健康和安全,請穿著實驗服并戴一次性手套或乳膠手套操作。

參考文獻:

  1. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferationand cytotoxicity assays. Mosmann T (1983).Journal of Immunological Methods. 65:55–63.

  2. A highly water-soluble disulfonated tetrazolium salt as a chromogenic indicator forNADH as well as cell viability,Talanta,44, 1299-1305, 1997.

  3. A Vital Role for Ape1/Ref1 Protein in Repairing Spontaneous DNA Damage in HumanCells, Molecular Cell, 17, 463-470, 2005.

  4. 4. Efficacy of RNAi-induced down-regulation of wild-type FLT3 on NF-kB pathway inTHP-1 cell line. Lu J, Yue BH, Wang CM, Bai ST, Sheng GY. Life Science Journal.Vol.5,No.2, 2008.

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