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細胞周期與凋亡檢測試劑盒

逆战助手怎么补签 www.mkrqm.icu 產品簡介:

  • 本產品檢測原理基于碘化丙啶(Propidium,PI)染色方法分析細胞周期和凋亡。碘化丙啶是一種雙鏈DNA染料,其嵌入雙鏈DNA 中可以產生熒光,并且熒光的強度和雙鏈 DNA 的量成正比。

  • 在細胞周期中,G0和G1 期細胞有一套染色體,G2 和 M 期細胞有兩套染色體,S 期介于兩者之間。經過碘化丙啶染色后,處在不同細胞周期中的細胞的熒光強度是不一樣的。假定G0 和 G1 期的細胞熒光強度為 1,那么G2 和 M 期的細胞的熒光強度為 2,S 期的細胞介于 1和 2之間。

  • 細胞凋亡時,由于細胞核皺縮和DNA 片段化,染色時 DNA 片段會從打孔的細胞膜處丟失,流式細胞儀檢測時,熒光強度小于 1,即Sub-G1 峰或者凋亡細胞峰。

  • 細胞凋亡也可以用流式細胞儀觀察細胞光散射的變化來檢測。凋亡前期,染色質皺縮,細胞密度增加,前向角光散色顯著降低。凋亡后期,細胞產生凋亡小體,前向角光散射和側向角光散色都顯著降低。

  • 本試劑盒可用于培養的貼壁細胞或者懸浮細胞檢測,也可用于組織細胞檢測。

貯藏條件:

-20,避光條件下,保存1年以上。0-5,避光條件下,可以保存2個月。

使用說明:

1.自備試劑:PBS;70%乙醇

2.細胞樣品準備:

a、 貼壁細胞:吸棄細胞培養液,胰酶消化吹打細胞,制備單細胞懸液,1000g離心 5分鐘沉淀細胞后,用1ml 預冷的 PBS 重懸。然后再一次 1000g 離心 5分鐘沉淀細胞。

b、 懸浮細胞:1000g 離心 5分鐘沉淀細胞后,用1ml 預冷的 PBS 重懸。然后再一次 1000g 離心 5分鐘沉淀細胞。

c、 組織細胞:將組織塊用剪刀剪成盡量小的小塊后,用0.25%的胰酶消化 0.5-1 個小時。經過 200-400 目篩網過濾得到單細胞懸液。1000g離心 5分鐘沉淀細胞后,用1ml 預冷的 PBS 重懸。然后再一次 1000g 離心 5分鐘沉淀細胞。

3.細胞固定:細胞沉淀用 1ml 預冷的 70%乙醇輕輕混勻,4固定 2個小時以上或者過夜。接下來1000g 離心 5 分鐘沉淀細胞后,用 1ml 預冷的PBS 重懸。然后再次 1000g 離心 5 分鐘沉淀細胞。

4.染色:碘化丙啶染色液配置:0.5ml 染色緩沖液中加入10 ul碘化丙啶儲液和10ul RNase A,混勻待用。每個細胞樣品加入 0.5ml 配置好的碘化丙啶染色液,輕輕混勻重懸細胞。37,避光溫浴30 分鐘后,即可上流式細胞儀檢測(5 小時內完成為佳)。激發波長為 488nm,檢測紅色熒光。

注意事項:

  1. 操作碘化丙啶時,應注意防護,?;ぱ劬?、避免吸入、并戴一次性手套。

  2. 碘化丙啶存在淬滅現象,保存和使用過程中注意避光。

包裝規格:

貨號

規格

包裝規格

染色緩沖液

碘化丙啶

RNase A

A001-50

50 assays

25 mL

500 uL

500 uL

A001-200

200 assays

100ml

2 ml

2 ml

A001-1000

1000 assays

500ml

10 ml

10ml

A001-X

1000 次以上




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