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銳賽生物

靶標發現與功能驗證基因操作和基因組編輯藥物靶標開發生化/細胞水平驗證高通量高內涵分析GPCR/核受體檢測激酶檢測體外藥理學體外安全性評價藥代動力學毒理學評價藥代動力學/毒理學抗腫瘤藥理評價代謝類和心腦血管疾病藥理評價中樞神經系統藥理評價炎癥/自身免疫疾病藥理評價體內藥理學立項成果展示腫瘤個性化治療項目QPCRWB檢測ELISA檢測甲基化檢測SNP檢測高效液相色譜法(HPLC)蛋白質譜基因芯片核酸、蛋白分析服務目的基因的ORF克隆化學合成質粒載體構建siRNA的細胞轉染及篩選技術服務shRNA載體構建及篩選技術服務RNAi病毒包裝及篩選技術服務miRNA的表達載體構建及病毒包裝載體構建及篩選服務chipchip-seqIPCO-IPRNA免疫共沉淀(RIP)RNA pull down免疫共沉淀實驗服務慢病毒包裝腺病毒包裝細胞培養原代細胞分離干細胞誘導分化CCK-8檢測流式周期檢測流式凋亡檢測流式分選細胞流式鑒定細胞表面抗體活性氧(ROS)檢測線粒體膜電位檢測transwell檢測管腔形成實驗細胞黏附實驗細胞克隆形成實驗細胞免疫熒光檢測穩轉株構建雙熒光素酶檢測細胞干性成球能力磁珠分選細胞MDA(丙二醛)檢測酶活動力學檢測HDA檢測細胞實驗服務常規化學染色免疫組化(IHC)免疫熒光(IF)原位雜交(ISH)熒光原位雜交(FISH)原位末端標記染色(TUNEL)組織樣本處理拍照處理病理學檢測服務裸鼠皮下成瘤(CDX模型)人源腫瘤移植模型(PDX模型)糖尿病/肥胖模型心血管類疾病模型腎臟疾病模型肝臟疾病模型炎癥與自身免疫疾病模型呼吸系統疾病模型其他疾病模型動物實驗服務2019精品SCI2018精品SCI2017精品SCI往年精品SCI案例庫漂亮SCI案例庫科研轉化成果u.cad癌癥篩查檢測全外顯子組基因檢測其他疾病基因檢測生物信息數據分析服務腫瘤學領域研究平臺病理學中心實驗室心血管與代謝領域疾病研究平臺炎癥與自身免疫疾病領域研究平臺特發肺纖維化疾病領域研究平臺抗體藥物一體化臨床前研發平臺藥性評價平臺公司新聞價值金字塔三元悖論為客戶贏得榮譽誠覓英才內部推薦加入我們留言板聯系我們推薦朋友SCI論文發表獎勵制度科研資助POLOdeliverer3000CCK-8Annexin V-FITCAnnexin V-RFPECL 發光液細胞周期與凋亡檢測自研試劑基因質粒病毒免費送細胞庫動物飼料促銷活動

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動物實驗、載體構建、細胞實驗、病理學檢測、免疫沉淀、核酸蛋白分析

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細胞培養

cell culture



實驗原理


細胞培養是采用無菌操作的方法,模擬動物體內的生理條件,在體外進行培養.使其不斷地生長、繁殖,從而觀察細胞的增殖、分化以及細胞衰老等過程的生命現象。常見的細胞培養方式可分為貼壁和懸浮兩種。細胞培養的常規操作包括:1)細胞的接種和傳代;2)細胞計數;3)細胞的復蘇和凍存。常見的細胞培養類型見圖7.1。


圖片.png

圖7.1常見的細胞培養類型

            A:三種常見的細胞形態;

B :有限傳代細胞系和無限傳代細胞系


技術應用


細胞培養至最佳狀態后可進行各種處理,如1)加藥處理;2)質粒轉染;3)病毒感染;4)培養條件的改變等,進而對細胞功能進行各項檢測,并對細胞信號通路蛋白進行表達分析及功能研究。


實驗流程




實物

數據信息

實驗周期

客戶提供

細胞株(凍存株或培養細胞)

細胞培養信息

2周

我們提供

后續實驗所需數量的細胞

基本實驗步驟、細胞培養照片


實驗結果展示


               圖7.2 原代細胞培養成功案例


TROUBLESHOOTING


實驗問題

原因

推薦解決方法

細胞復蘇失敗?

凍存操作

細胞凍存過程要求降溫緩慢,凍存細胞密度不能多低,操作過程動作要輕柔,凍存液配制后不能存放太久。

復蘇操作

細胞復蘇要注意快速融化,操作過程動作要輕柔,接種前采用預熱的培養基緩慢稀釋。

在培養細胞死亡?

培養箱條件發生變化

檢查培養箱溫度CO2濃度是否發生很大波動。

培養基發生變態

有毒代謝產物堆積對細胞毒性較大。

細胞生長速度變慢?

細胞傳代次數過多

對于無線傳代細胞建議采用代數較低的細胞。

培養基和血清

采用該細胞推薦及質量更好的培養基和血清;補加L-glutamine或必需生長因子

細胞接種密度過低

提高細胞接種密度。

支原體污染

丟棄污染的細胞株,更換新的細胞株及培養基。



常見問題FAQ


Q:細胞的運送有哪些注意事項?

A通常分為細胞凍存株和培養細胞兩種運送方式,

注意事項如下:

細胞凍存株運送:將凍存的細胞株放在盛有液氮或干,冰的特殊容器中保存運送,不宜長時間運輸。注意裝有液氯的保溫瓶不要擰緊,以防止瓶內氣壓過大無法開啟甚至引起爆炸。

培養細胞運送:一般選擇生長良好的細胞,鋪板密度40%-60%為宜,去掉原培養液,補充新培養液至瓶頸部,保留微量空氣(注意:若空氣留量過多,運輸時大氣泡來回流動對細胞狀態有影響),擰緊瓶,并用膠帶密封,放在用棉花等做防震防壓處理的,運送盒內。一般快遞周期3天內可保證細胞狀態沒有,問題,注意冬天氣溫過低無法采用此方法快遞。


Q:關于提供的細胞需提供哪些培養信息?

A :請告知細胞的具體名稱及來源、培養基類型及血清濃度、培養溫度及Co濃度、細胞增殖時間、傳代方式,我們會根據以上信息對細胞進行培養、擴增和凍存工作。


Q :原代細胞的分離培養相對常規細胞系的培養有哪些注意要點?

A :凡是來源于胚胎、組織器官及外周血,經特殊分離方法制備而來的原初培養的細胞稱之為原代細胞。原代細胞的培養有其難度,區別于常規細胞系注意要點如下:

1) 細胞的取材來源:取材應注意組織類型、分化程度、年齡等,一般來講,胚胎組織較成熟個體組織容易培養,分化低的較分化高的組織容易生長,腫瘤組織較正常組織容易培養。

2) 取材應嚴格無菌:確保所取材料及器皿手術器材無菌并在無菌條件下操作。

3) 防止鄰近組織細胞的污染:分離時要仔去除所取材料上的血液(血塊)、肪、壞死組織及結締組,可根據客戶要求進行細胞的免疫化學檢測。

4) )組胞量少且狀態難以調整:受到取材困難等因素的影響,獲得的細胞量少,細胞狀態不佳造成的細胞增殖緩慢往往造成實驗室人員長時間進行細胞狀態調整,無法獲得足量的細胞進行后城檢測實。


Q :常見的細胞培養基有哪些?

培養基類型

特點

RPMI-1640

專為淋巴細胞培養而設計的,廣泛應用于懸浮細胞的培養及腫瘤細胞的培養。

MEM

由Eagle’基礎培養基發展而來的,增加了組分的范圍及濃度。

DMEM

在MEM的基礎上將氨基酸等成分濃度加倍,分低糖型和高糖型,后者更適于生長較快、附著較困難的腫瘤細胞。

αMEM

含有附加的氨基酸、維生素以及核苷2和脂肪酸,它可廣泛應用于各種細胞類型,包括對營養成分要求苛刻的細胞。

F12

培養基成分復雜,含多種微量元素,可與DMEM以11混合使用。

McCoy’ s5A

主要為肉瘤細胞的培養所設計,可支持多種原代移植物(如骨髓、皮膚、肺和脾臟等)的生長,除一般的原代細胞培養,還主要用于作組織活檢培養、一些淋巴細胞的培養以及難培養細胞的生長支持。

無血清培養基

由基礎培養基和替代血清的補充成分組成。無血清細胞培養基的使用保證了實驗結果的準確性、可重復性和穩定性,減少了細胞污染,簡化了提純和鑒定各種細胞產物的程序。



Q :常見的綢胞污染類型有哪些?

A :常見的細胞污染類型有細菌,真,支體,病,酵母污染。如果客戶接收到的細胸在培養過程中遇到細胞污染,請盡快提供細胞污染的片,并且詳細告知污染產生的時間,是否為個別孔污染等詳細信,以便于我們分析確認,在最短的時間內為您解決污染問題。


Q :為什么培養的細胞要及時傳代?而哪些細胞則不再發生增值?

A :體外培養的細胞大多具有生長接觸卻制的特性,也就是說當一個細胞被其他綢胞包圍的時候,它就會停止生長,及時傳代后,細胞的生長得以繼續。因此客戶需詳細告知我們細胞的消化時間,傳代比例,增殖時間等重要的信息。對于高度分化的細胞如紅細胞,神經細胞己喪失了分能力不再進行增值,如果細胞量提供有限的話,要根據實驗求計劃好所需的組胞量,以防止后續實驗無法順利進行。


參考文獻

1. R.Ian Freshney. Culture of Animal Cells:A Manual of Basic Technique and Specialized Applications[M].Wiley-Blackwell Press,2011.

2. David L.Spector,Robert D. Goldman, Leslie A. Leinwand. Cells: a laboratory manual[M]. Cold Spring HarborLabrotary Press,1998.

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