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靶標發現與功能驗證基因操作和基因組編輯藥物靶標開發生化/細胞水平驗證高通量高內涵分析GPCR/核受體檢測激酶檢測體外藥理學體外安全性評價藥代動力學毒理學評價藥代動力學/毒理學抗腫瘤藥理評價代謝類和心腦血管疾病藥理評價中樞神經系統藥理評價炎癥/自身免疫疾病藥理評價體內藥理學立項成果展示腫瘤個性化治療項目QPCRWB檢測ELISA檢測甲基化檢測SNP檢測高效液相色譜法(HPLC)蛋白質譜基因芯片核酸、蛋白分析服務目的基因的ORF克隆化學合成質粒載體構建siRNA的細胞轉染及篩選技術服務shRNA載體構建及篩選技術服務RNAi病毒包裝及篩選技術服務miRNA的表達載體構建及病毒包裝載體構建及篩選服務chipchip-seqIPCO-IPRNA免疫共沉淀(RIP)RNA pull down免疫共沉淀實驗服務慢病毒包裝腺病毒包裝細胞培養原代細胞分離干細胞誘導分化CCK-8檢測流式周期檢測流式凋亡檢測流式分選細胞流式鑒定細胞表面抗體活性氧(ROS)檢測線粒體膜電位檢測transwell檢測管腔形成實驗細胞黏附實驗細胞克隆形成實驗細胞免疫熒光檢測穩轉株構建雙熒光素酶檢測細胞干性成球能力磁珠分選細胞MDA(丙二醛)檢測酶活動力學檢測HDA檢測細胞實驗服務常規化學染色免疫組化(IHC)免疫熒光(IF)原位雜交(ISH)熒光原位雜交(FISH)原位末端標記染色(TUNEL)組織樣本處理拍照處理病理學檢測服務裸鼠皮下成瘤(CDX模型)人源腫瘤移植模型(PDX模型)糖尿病/肥胖模型心血管類疾病模型腎臟疾病模型肝臟疾病模型炎癥與自身免疫疾病模型呼吸系統疾病模型其他疾病模型動物實驗服務2019精品SCI2018精品SCI2017精品SCI往年精品SCI案例庫漂亮SCI案例庫科研轉化成果u.cad癌癥篩查檢測全外顯子組基因檢測其他疾病基因檢測生物信息數據分析服務腫瘤學領域研究平臺病理學中心實驗室心血管與代謝領域疾病研究平臺炎癥與自身免疫疾病領域研究平臺特發肺纖維化疾病領域研究平臺抗體藥物一體化臨床前研發平臺藥性評價平臺公司新聞價值金字塔三元悖論為客戶贏得榮譽誠覓英才內部推薦加入我們留言板聯系我們推薦朋友SCI論文發表獎勵制度科研資助POLOdeliverer3000CCK-8Annexin V-FITCAnnexin V-RFPECL 發光液細胞周期與凋亡檢測自研試劑基因質粒病毒免費送細胞庫動物飼料促銷活動

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動物實驗、載體構建、細胞實驗、病理學檢測、免疫沉淀、核酸蛋白分析

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流式周期檢測

Flow cycle detection



實驗原理


細胞周期(Cell Cycle)是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結束所經歷的全過程,細胞的遺傳物質復制并均等地分配給兩個子細胞。細胞周期分為間期與分裂期兩個階段。間期又分為三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)與DNA合成后期(G2期)。某些細胞在分裂結束后暫時離開細胞周期,停止細胞分裂,執行一定生物學功能(G0期)。

流式細胞儀PI染色法檢測細胞周期的原理:由于細胞周期各時相的DNA 含量不同,通常正常細胞的G1/ G0 期具有二倍體細胞的DNA含量(2N) ,而 G2/ M 期具有四倍體細胞的DNA 含量(4N) ,而S期的DNA 含量介于二倍體和四倍體之間。PI可以與DNA結合,其熒光強度直接反映了細胞內DNA含量。因此,通過流式細胞儀PI染色法對細胞內DNA含量進行檢測時,可以將細胞周期各時相區分為G1/G0 期,S 期和G2/M 期,獲得的流式直方圖對應的各細胞周期可通過特殊軟件計算各時相的細胞百分率(如圖7.7所示)


圖7.7流式周期檢測圖說明


技術應用


檢測異倍體的腫瘤細胞,檢測藥物、基因或蛋白等對細胞周期的影響。


實驗流程




實物

數據信息

實驗周期

客戶提供

細胞株(凍存株或培養細胞)及所需藥品

細胞培養信息和藥物處理方式

3周

我們提供

剩余藥品

基本實驗步驟、細胞培養照片、流式細胞儀的檢測結果圖、分析后的數據和統計結果


實驗結果展示



G0/G1

S

G2/M

0h

58.06

40.30

1.64

24h

50.14

36.21

13.65

36h

40.20

29.57

30.23

48h

54.33

27.05

18.62


圖1 流式細胞周期檢測圖


TROUBLESHOOTING

實驗問題

原因

推薦解決方法

TdR法雙阻斷后細胞未被有效阻斷至G0/G1和S期?

待測細胞周期超過30小時

該同步方法不適合細胞周期過長的細胞,需改用其他阻斷方法。

收樣時細胞量過少?

藥物作用過強

降低藥物濃度,減少處理時間,降低對細胞的凋亡作用。

周期實驗數據結果異常那個?

細胞接種密度過大

造成生長異常

適當降低細胞接種密度。













常見問題FAQ


Q :流式上機檢測細胞周期所需要的細胞量大概是多少?

A :周期檢測一般采用6孔板進行實驗,每孔細胞量10的6次方左右。如果進行周期預實驗,則檢測所需要的時間點較多,一般每隔12小時,需要取6個時間點,每個時間點都需要留細胞樣待測。需要的細胞量較大,務必通過細胞擴增得到所需實驗的細胞量。


Q :周期檢測前對細胞同步化處理的目的和方法是?

A :由于群體中各個細胞處于不同的細胞周期時相之,為了研究某一時相細胞的增殖、凋亡或基因表,需要使細胞處于細胞周期的同一時相,這就是細胞同步化技術。同步化通常有兩種方式,血清饑餓法和藥物阻斷法。采用血清饑餓法可得到GO期細,可采用0.5%-1%小牛血清的培養基培養細胞48-72 h。采用藥物阻斷法效率高,是目前最主要的細胞同步化方法。對于倍增時間低于30h的細胞,可采用胸腺嘧啶核苷(TdR )雙阻斷法同步化,即連續2次處理靶細胞各24h,可以將99%細胞阻滯在GO/G1和S期。


Q :流式細胞儀PI染色法檢測細胞周期前,細胞需做哪些處理?

A :細胞內的DNA和RNA都可以和PI結合,實驗前需用RNase將RNA消化后進行檢測;由于PI不能通過細胞膜完整的細胞(如活細胞和早期凋亡細胞),在標本制備,必須先用終濃度70%乙醇或其他破膜劑增強細胞膜的通透性,才能使PI進入細胞內與細胞內的核酸結合。


Q :除流式細胞儀PI染色法外,周期檢測還有哪些常見的方法?

A :細胞周期的流式細胞儀PI染色法可精確定量周期不同階段的細胞比例,且方法操作簡便。其他可以檢測周期的方法還有1) Brdu (5-尿啶脫氧核苷)滲入法: BrdU是胸苷的一種類似物,加入培養基后,可做為細胞DNA復制的原料,采用熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測,可定量研究進入S期的細胞比例。2)應用單克隆抗體識別細胞周期蛋白并結合DNA含量分析細胞周期:如在G1期早期cyclin D1表達處于峰值, cyclin E峰值出現在G1/S, cyclin A對應G2M, cyclin B1則可標示G2/M晚期。此方法要注意周期蛋白與各細胞周期的對應關系在不同種類的納胞中并非都遵循。


參考文獻

1. David Morgan.The Cell Cycle: Prnciples of Contrl [M]. New Science Pres 2006.

2. Teres S. Hawley.Robert G. Hawley Flow Cytometry Protocol[M] Humana Press.2004.

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